El TFA (ácido trifluoroacético, CF3COOH, CAS 76-05-1) es un ácido orgánico fluorado de masa molar 114.02 g/mol, pKa 0.23 (aproximadamente 100000x más ácido que el ácido acético), líquido volátil (pe 72°C) miscible con el agua y los disolventes orgánicos. Es el reactivo más emblemático de la química de péptidos, utilizado tanto en la síntesis SPPS como en la purificación por RP-HPLC y el análisis estructural (MS, Edman).
Escisión final en SPPS Fmoc. En la síntesis SPPS Fmoc, el TFA se utiliza como ácido fuerte para la escisión final simultánea del péptido de la resina y de los grupos protectores de las cadenas laterales (tBu para Ser/Thr/Tyr, Trt para Cys/Asn/Gln/His, Pbf para Arg, Boc para Trp/Lys, OtBu para Asp/Glu). El cóctel estándar es 95% TFA / 2.5% H2O / 2.5% TIS (triisopropilsilano como captador, 2-4 h a temperatura ambiente). Existen formulaciones especializadas para los péptidos ricos en Cys/Met (Reagent K: TFA/tioanisol/agua/fenol/EDT 82.5:5:5:5:2.5) o en Trp.
Agente de par iónico en RP-HPLC. Añadido al 0.05-0.1% a los disolventes A (agua) y B (acetonitrilo) de un gradiente de RP-HPLC de péptidos, el TFA actúa como agente de par iónico: el TFA protonado forma un par iónico con los grupos básicos del péptido (NH3+, guanidinio, imidazolio), enmascarando la carga y aumentando la retención hidrofóbica en la fase estacionaria C18. Esto mejora la simetría y la resolución de los picos. Inconveniente: el TFA suprime la señal en ESI-MS positiva, lo que motiva su sustitución por ácido fórmico (0.1%) en LC-MS analítica.
Precauciones y seguridad. El TFA es corrosivo (quemaduras cutáneas, oculares y pulmonares por inhalación), volátil y potencialmente ecotóxico (producto de degradación persistente). Se almacena en frasco de vidrio borosilicato o de PTFE, bajo atmósfera inerte de N2, al abrigo de la luz y del calor. La eliminación de los residuos de TFA de los péptidos (aductos de TFA) puede lograrse mediante liofilizaciones repetidas en HCl 10 mM, desalado en C18 Sep-Pak o resina de intercambio aniónico.
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