[{"data":1,"prerenderedAt":-1},["ShallowReactive",2],{"dispatch-exceptions":3,"glossary-rp-hplc":6},{"skip":4,"extra":5},[],[],{"id":7,"slug":8,"term":9,"definition":10,"related_product_ids":11,"related_resource_ids":12,"meta_description":13,"term_i18n":14,"definition_i18n":15,"status":19,"created_at":20,"updated_at":21,"meta_description_i18n":22,"brand":26,"relatedProducts":27,"relatedResources":28,"relatedArticles":29},"268ba179-cbf4-497f-a9fc-d65fe2d8d8bf","rp-hplc","RP-HPLC","La \u003Cstrong>RP-HPLC\u003C/strong> (\u003Cem>Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography\u003C/em>, chromatographie liquide haute performance en phase inverse) est la \u003Cem>technique analytique de référence\u003C/em> pour la séparation, la purification et le contrôle de pureté des peptides synthétiques. Elle repose sur la séparation selon l'\u003Cem>hydrophobie\u003C/em> des molécules, en utilisant une phase stationnaire apolaire et une phase mobile polaire — inverse de la chromatographie normale, d'où son nom.\n\n\u003Cstrong>Principe et phase stationnaire\u003C/strong>. La colonne RP-HPLC est typiquement une silice fonctionnalisée avec des chaînes alkyl greffées : \u003Cstrong>C18\u003C/strong> (octadécyl, la plus universelle pour peptides <5 kDa), \u003Cstrong>C8\u003C/strong> (octyl, peptides modérément hydrophobes), \u003Cstrong>C4\u003C/strong> (butyl, peptides et petites protéines jusqu'à 20 kDa), \u003Cstrong>C3/C1\u003C/strong> ou \u003Cem>phényl\u003C/em> (rétention sélective aromatique). Les dimensions typiques sont 250 × 4.6 mm analytique, 250 × 21.2 mm semi-préparatif, 250 × 50 mm préparatif. La taille des particules (3, 5 ou 10 μm) et la porosité (100-300 Å) affectent résolution et capacité.\n\n\u003Cstrong>Phase mobile et gradient\u003C/strong>. Le gradient standard combine \u003Cem>eau + 0.1% TFA\u003C/em> (solvant A, phase aqueuse acide) et \u003Cem>acétonitrile + 0.1% TFA\u003C/em> (solvant B, phase organique), le TFA jouant le rôle d'\u003Cem>ion-pairing agent\u003C/em> qui neutralise les charges des peptides et améliore la symétrie des pics. Un gradient typique de 10 à 70% de B sur 20-40 min permet la séparation de peptides linéaires standards. La détection UV à 214 nm (liaison peptidique) et 280 nm (Tyr, Trp) est universelle ; les détecteurs PDA, ELSD et MS (LC-MS couplée) apportent information supplémentaire.\n\n\u003Cstrong>Applications aux peptides\u003C/strong>. La RP-HPLC analytique valide la \u003Cem>pureté\u003C/em> des lots (≥ 98% sur peptides commerciaux RUO), identifie les impuretés (délétion, deamidation, oxydation, racémisation) et leur quantification relative. La RP-HPLC préparative est l'étape finale critique de la production SPPS pour séparer le peptide-cible des séquences tronquées, fragments TFA-adduits et impuretés de synthèse. La technique est documentée dans les monographies USP <621> et Ph. Eur. 2.2.46 pour les produits pharmaceutiques peptidiques.",[],[],"RP-HPLC (chromatographie liquide haute performance en phase inverse) : méthode de référence pour la pureté et l'analyse de peptides.",{"de":9,"en":9,"es":9},{"de":16,"en":17,"es":18},"\u003Cstrong>RP-HPLC\u003C/strong> (\u003Cem>Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie\u003C/em>) ist das \u003Cem>analytische Referenzverfahren\u003C/em> für die Trennung, Aufreinigung und Reinheitskontrolle synthetischer Peptide. Sie beruht auf einer Trennung nach \u003Cem>Hydrophobie\u003C/em> mit einer unpolaren stationären Phase und einer polaren mobilen Phase — umgekehrt zur Normalphasenchromatographie, daher der Name.\n\n\u003Cstrong>Prinzip und stationäre Phase\u003C/strong>. Die RP-HPLC-Säule besteht typischerweise aus funktionalisiertem Kieselgel mit gebundenen Alkylketten: \u003Cstrong>C18\u003C/strong> (Octadecyl, am universellsten für Peptide <5 kDa), \u003Cstrong>C8\u003C/strong> (Octyl, mäßig hydrophobe Peptide), \u003Cstrong>C4\u003C/strong> (Butyl, Peptide und kleine Proteine bis 20 kDa), \u003Cstrong>C3/C1\u003C/strong> oder \u003Cem>Phenyl\u003C/em> (selektive Retention von Aromaten). Typische Abmessungen sind 250 × 4.6 mm analytisch, 250 × 21.2 mm semipräparativ, 250 × 50 mm präparativ. Partikelgröße (3, 5 oder 10 μm) und Porosität (100-300 Å) beeinflussen Auflösung und Kapazität.\n\n\u003Cstrong>Mobile Phase und Gradient\u003C/strong>. Der Standardgradient kombiniert \u003Cem>Wasser + 0.1% TFA\u003C/em> (Lösungsmittel A, saure wässrige Phase) und \u003Cem>Acetonitril + 0.1% TFA\u003C/em> (Lösungsmittel B, organische Phase), wobei TFA als \u003Cem>Ionenpaarreagenz\u003C/em> wirkt, das die Ladungen des Peptids neutralisiert und die Peaksymmetrie verbessert. Ein typischer Gradient von 10 bis 70% B über 20-40 min ermöglicht die Trennung gängiger linearer Peptide. Die UV-Detektion bei 214 nm (Peptidbindung) und 280 nm (Tyr, Trp) ist universell; PDA-, ELSD- und MS-Detektoren (gekoppelte LC-MS) liefern zusätzliche Informationen.\n\n\u003Cstrong>Anwendungen bei Peptiden\u003C/strong>. Die analytische RP-HPLC validiert die \u003Cem>Reinheit\u003C/em> einer Charge (≥98% bei kommerziellen RUO-Peptiden), identifiziert Verunreinigungen (Deletion, Desamidierung, Oxidation, Racemisierung) und quantifiziert sie relativ. Die präparative RP-HPLC ist der entscheidende letzte Schritt der SPPS-Produktion, um das Zielpeptid von verkürzten Sequenzen, TFA-Addukt-Fragmenten und Syntheseverunreinigungen abzutrennen. Das Verfahren ist in den Monographien USP <621> und Ph. Eur. 2.2.46 für pharmazeutische Peptidprodukte beschrieben.","\u003Cstrong>RP-HPLC\u003C/strong> (\u003Cem>Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography\u003C/em>) is the \u003Cem>reference analytical technique\u003C/em> for separation, purification and purity control of synthetic peptides. It relies on separation by \u003Cem>hydrophobicity\u003C/em>, using a non-polar stationary phase and polar mobile phase — inverse of normal-phase chromatography, hence the name.\n\n\u003Cstrong>Principle and stationary phase\u003C/strong>. The RP-HPLC column is typically functionalised silica with grafted alkyl chains: \u003Cstrong>C18\u003C/strong> (octadecyl, most universal for peptides <5 kDa), \u003Cstrong>C8\u003C/strong> (octyl, moderately hydrophobic peptides), \u003Cstrong>C4\u003C/strong> (butyl, peptides and small proteins up to 20 kDa), \u003Cstrong>C3/C1\u003C/strong> or \u003Cem>phenyl\u003C/em> (aromatic selective retention). Typical dimensions are 250 × 4.6 mm analytical, 250 × 21.2 mm semi-preparative, 250 × 50 mm preparative. Particle size (3, 5 or 10 μm) and porosity (100-300 Å) affect resolution and capacity.\n\n\u003Cstrong>Mobile phase and gradient\u003C/strong>. The standard gradient combines \u003Cem>water + 0.1% TFA\u003C/em> (solvent A, acidic aqueous phase) and \u003Cem>acetonitrile + 0.1% TFA\u003C/em> (solvent B, organic phase), TFA acting as \u003Cem>ion-pairing agent\u003C/em> neutralising peptide charges and improving peak symmetry. A typical 10 to 70% B gradient over 20-40 min allows separation of standard linear peptides. UV detection at 214 nm (peptide bond) and 280 nm (Tyr, Trp) is universal; PDA, ELSD and MS detectors (coupled LC-MS) provide additional information.\n\n\u003Cstrong>Peptide applications\u003C/strong>. Analytical RP-HPLC validates batch \u003Cem>purity\u003C/em> (≥98% on commercial RUO peptides), identifies impurities (deletion, deamidation, oxidation, racemisation) and their relative quantification. Preparative RP-HPLC is the critical final step of SPPS production to separate target peptide from truncated sequences, TFA-adduct fragments and synthesis impurities. The technique is documented in USP <621> and Ph. Eur. 2.2.46 monographs for pharmaceutical peptide products.","\u003Cstrong>RP-HPLC\u003C/strong> (\u003Cem>cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa\u003C/em>) es la \u003Cem>técnica analítica de referencia\u003C/em> para la separación, la purificación y el control de pureza de los péptidos sintéticos. Se basa en la separación por \u003Cem>hidrofobicidad\u003C/em>, mediante una fase estacionaria apolar y una fase móvil polar — a la inversa de la cromatografía en fase normal, de ahí su nombre.\n\n\u003Cstrong>Principio y fase estacionaria\u003C/strong>. La columna de RP-HPLC es típicamente de sílice funcionalizada con cadenas alquílicas injertadas: \u003Cstrong>C18\u003C/strong> (octadecilo, la más universal para péptidos <5 kDa), \u003Cstrong>C8\u003C/strong> (octilo, péptidos moderadamente hidrófobos), \u003Cstrong>C4\u003C/strong> (butilo, péptidos y proteínas pequeñas de hasta 20 kDa), \u003Cstrong>C3/C1\u003C/strong> o \u003Cem>fenilo\u003C/em> (retención selectiva de aromáticos). Las dimensiones típicas son 250 × 4.6 mm en analítica, 250 × 21.2 mm en semipreparativa y 250 × 50 mm en preparativa. El tamaño de partícula (3, 5 o 10 μm) y la porosidad (100-300 Å) influyen en la resolución y la capacidad.\n\n\u003Cstrong>Fase móvil y gradiente\u003C/strong>. El gradiente estándar combina \u003Cem>agua + 0.1% TFA\u003C/em> (disolvente A, fase acuosa ácida) y \u003Cem>acetonitrilo + 0.1% TFA\u003C/em> (disolvente B, fase orgánica); el TFA actúa como \u003Cem>agente de par iónico\u003C/em> que neutraliza las cargas del péptido y mejora la simetría de los picos. Un gradiente típico del 10 al 70% de B en 20-40 min permite separar los péptidos lineales estándar. La detección UV a 214 nm (enlace peptídico) y 280 nm (Tyr, Trp) es universal; los detectores PDA, ELSD y MS (acoplamiento LC-MS) aportan información adicional.\n\n\u003Cstrong>Aplicaciones en péptidos\u003C/strong>. La RP-HPLC analítica valida la \u003Cem>pureza\u003C/em> de los lotes (≥98% en los péptidos RUO comerciales), identifica las impurezas (deleción, desamidación, oxidación, racemización) y permite su cuantificación relativa. La RP-HPLC preparativa es la etapa final crítica de la producción por SPPS para separar el péptido diana de las secuencias truncadas, los fragmentos aducto de TFA y las impurezas de síntesis. La técnica está documentada en las monografías USP <621> y Ph. Eur. 2.2.46 para los productos peptídicos farmacéuticos.","published","2026-04-23T16:14:10.311307+00:00","2026-09-25T10:28:35.383251+00:00",{"de":23,"en":24,"es":25},"RP-HPLC (Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie): Referenzmethode für Reinheit und Analyse von Peptiden.","RP-HPLC (reverse-phase high-performance liquid chromatography): reference method for peptide purity and analysis.","RP-HPLC (cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa): método de referencia para el análisis y la pureza de los péptidos.","lab",[],[],[30,48,58],{"id":31,"slug":32,"title":33,"excerpt":34,"image":35,"published_at":36,"topic":37},"ff0eb393-ba33-4489-9fba-25817137bb27","analytique-peptidique-lcms-rmn-hplc-edman-guide-complet-recherche","Analytique peptidique : LC-MS haute résolution, RMN, HPLC et Edman - Guide complet recherche","Décryptez la caractérisation complète d'un peptide : RP-HPLC préparative et analytique, LC-MS haute résolution Orbitrap/QTOF, RMN 2D (COSY/TOCSY/NOESY), dégradation d'Edman, cartographie peptidique MS/MS, dichroïsme circulaire. 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